Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro
Апстракт
Vrste iz familije Botryosphaeriaceae su oportunistički patogeni jabučastih voćaka u
kojima egzistiraju kao endofiti, obično u obliku latentnih zaraza, što u velikoj meri otežava
njihovo suzbijanje. Mogu izazivati simptome truleži i nanositi velike gubitke u prinosu i
kvalitetu plodova jabuke, naročito u toplim i vlažnim regionima njenog gajenja.
Iz plodova jabuke sa simptomima truleži uzorkovanih iz nekomercijalnog zasada u
kome nisu primenjivani fungicidi, standardnim fitopatološkim metodama urađena je izolacija
na KDA podlogu. Nakon inkubacije pri temperaturi od 25ºC, u mraku, u trajanju od sedam
dana, na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija izvršena je morfološka identifikacija
patogena. PCR reakcijom umnoženi su delovi ITS regiona i dva gena (β-tubulin i faktor
elongacije) korišćenjem parova prajmera ITS1/ITS4, BT2a/BT2b i EF728F/EF986R, redom.
Dobijeni amplikoni su sekvencirani, sekvence analizirane i spojene, a zatim poređene BLAST
analizom sa sekvencama javno ...dostupnim u NCBI bazi podataka. Odabrani izolati korišćeni su
za ispitivanje osetljivosti na kombinaciju a.s. fluopiram + tebukonazol metodom inkorporacije
fungicida u hranljivu KDA podlogu. Korišćena je serija štok rastvora sledećih koncentracija u
hranljivoj podlozi: 0,01; 0,1; 1; 10; 100 i 1000 μl a.s./ml. Izolati su inkubirani pet dana, pri
temperaturi od 25ºC, nakon čega je vršeno merenje prečnika porasta micelije i izračunavanje
EC50 vrednosti metodom probit analize. Ispitivanje je obavljeno u tri ponavljanja. Fungicidno
odnosno fungistatično delovanje koncentracija na kojima nije zabeležen porast micelije
utvrđeno je presejavanjem izolata na čistu KDA podlogu i inkubacijom sedam dana pri
temperaturi od 25ºC.
Na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija (izleda i boje micelije) koje je
patogen formirao na podlozi, izolati su razvrstani u dve grupe. Izolati obe grupe formirali su
vazdušastu miceliju najpre beličate, a potom svetlosive do tamnosive boje, pri čemu su izolati
prve grupe formirali gustu miceliju sa jasno vidljivim grupisanim hifama koje se izdižu od
podloge pod pravim uglom, dok su izolati druge grupe formirali nešto ređu miceliju. Analizom
dobijenih DNK sekvenci tri genska regiona utvrđeno je prisustvo dve vrste iz fam.
Botryosphaeriaceae – Botryosphaeria dothidea i Diplodia seriata. Za ispitivanje osetljivosti na
kombinaciju fluopiram + tebukonazol odabran je po jedan izolat obe vrste. Rezultati
ispitivanja pokazali su veću osetljivost D. seriata (EC50=0,00023 μl/ml) u poređenju sa
osetljivošću B. dothidea (EC50=0,00108 μl/ml) na ispitivanu kombinaciju fungicida. Na
koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml nije zabeležen porast micelije izolata. Kombinacija
fluopiram + tebukonazol je pri koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml ispoljila fungicidno
delovanje na izolat D. seriata, dok su iste koncentracije delovale fungistatično na izolat B.
dothidea.
Кључне речи:
trulež plodova jabuke / Botryosphaeriaceae / fluopiram+tebukonazolИзвор:
XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova, 2023, 78-78Издавач:
- Beograd : Društvo za zaštitu bilja Srbije
Пројекти:
- Министарство науке, технолошког развоја и иновација Републике Србије, институционално финансирање - 200214 (Институт за пестициде и заштиту животне средине, Београд) (RS-MESTD-inst-2020-200214)
Напомена:
- Zlatibor, 27. - 30. novembar 2023. godine
Институција
Institut za pesticide i zaštitu životne sredineTY - CONF AU - Milošević, Milica AU - Stepanović, Miloš AU - Rekanović, Emil AU - Stepanović, Jelena PY - 2023 UR - https://ripest.pesting.org.rs/handle/123456789/722 AB - Vrste iz familije Botryosphaeriaceae su oportunistički patogeni jabučastih voćaka u kojima egzistiraju kao endofiti, obično u obliku latentnih zaraza, što u velikoj meri otežava njihovo suzbijanje. Mogu izazivati simptome truleži i nanositi velike gubitke u prinosu i kvalitetu plodova jabuke, naročito u toplim i vlažnim regionima njenog gajenja. Iz plodova jabuke sa simptomima truleži uzorkovanih iz nekomercijalnog zasada u kome nisu primenjivani fungicidi, standardnim fitopatološkim metodama urađena je izolacija na KDA podlogu. Nakon inkubacije pri temperaturi od 25ºC, u mraku, u trajanju od sedam dana, na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija izvršena je morfološka identifikacija patogena. PCR reakcijom umnoženi su delovi ITS regiona i dva gena (β-tubulin i faktor elongacije) korišćenjem parova prajmera ITS1/ITS4, BT2a/BT2b i EF728F/EF986R, redom. Dobijeni amplikoni su sekvencirani, sekvence analizirane i spojene, a zatim poređene BLAST analizom sa sekvencama javno dostupnim u NCBI bazi podataka. Odabrani izolati korišćeni su za ispitivanje osetljivosti na kombinaciju a.s. fluopiram + tebukonazol metodom inkorporacije fungicida u hranljivu KDA podlogu. Korišćena je serija štok rastvora sledećih koncentracija u hranljivoj podlozi: 0,01; 0,1; 1; 10; 100 i 1000 μl a.s./ml. Izolati su inkubirani pet dana, pri temperaturi od 25ºC, nakon čega je vršeno merenje prečnika porasta micelije i izračunavanje EC50 vrednosti metodom probit analize. Ispitivanje je obavljeno u tri ponavljanja. Fungicidno odnosno fungistatično delovanje koncentracija na kojima nije zabeležen porast micelije utvrđeno je presejavanjem izolata na čistu KDA podlogu i inkubacijom sedam dana pri temperaturi od 25ºC. Na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija (izleda i boje micelije) koje je patogen formirao na podlozi, izolati su razvrstani u dve grupe. Izolati obe grupe formirali su vazdušastu miceliju najpre beličate, a potom svetlosive do tamnosive boje, pri čemu su izolati prve grupe formirali gustu miceliju sa jasno vidljivim grupisanim hifama koje se izdižu od podloge pod pravim uglom, dok su izolati druge grupe formirali nešto ređu miceliju. Analizom dobijenih DNK sekvenci tri genska regiona utvrđeno je prisustvo dve vrste iz fam. Botryosphaeriaceae – Botryosphaeria dothidea i Diplodia seriata. Za ispitivanje osetljivosti na kombinaciju fluopiram + tebukonazol odabran je po jedan izolat obe vrste. Rezultati ispitivanja pokazali su veću osetljivost D. seriata (EC50=0,00023 μl/ml) u poređenju sa osetljivošću B. dothidea (EC50=0,00108 μl/ml) na ispitivanu kombinaciju fungicida. Na koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml nije zabeležen porast micelije izolata. Kombinacija fluopiram + tebukonazol je pri koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml ispoljila fungicidno delovanje na izolat D. seriata, dok su iste koncentracije delovale fungistatično na izolat B. dothidea. PB - Beograd : Društvo za zaštitu bilja Srbije C3 - XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova T1 - Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro EP - 78 SP - 78 ER -
@conference{ author = "Milošević, Milica and Stepanović, Miloš and Rekanović, Emil and Stepanović, Jelena", year = "2023", abstract = "Vrste iz familije Botryosphaeriaceae su oportunistički patogeni jabučastih voćaka u kojima egzistiraju kao endofiti, obično u obliku latentnih zaraza, što u velikoj meri otežava njihovo suzbijanje. Mogu izazivati simptome truleži i nanositi velike gubitke u prinosu i kvalitetu plodova jabuke, naročito u toplim i vlažnim regionima njenog gajenja. Iz plodova jabuke sa simptomima truleži uzorkovanih iz nekomercijalnog zasada u kome nisu primenjivani fungicidi, standardnim fitopatološkim metodama urađena je izolacija na KDA podlogu. Nakon inkubacije pri temperaturi od 25ºC, u mraku, u trajanju od sedam dana, na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija izvršena je morfološka identifikacija patogena. PCR reakcijom umnoženi su delovi ITS regiona i dva gena (β-tubulin i faktor elongacije) korišćenjem parova prajmera ITS1/ITS4, BT2a/BT2b i EF728F/EF986R, redom. Dobijeni amplikoni su sekvencirani, sekvence analizirane i spojene, a zatim poređene BLAST analizom sa sekvencama javno dostupnim u NCBI bazi podataka. Odabrani izolati korišćeni su za ispitivanje osetljivosti na kombinaciju a.s. fluopiram + tebukonazol metodom inkorporacije fungicida u hranljivu KDA podlogu. Korišćena je serija štok rastvora sledećih koncentracija u hranljivoj podlozi: 0,01; 0,1; 1; 10; 100 i 1000 μl a.s./ml. Izolati su inkubirani pet dana, pri temperaturi od 25ºC, nakon čega je vršeno merenje prečnika porasta micelije i izračunavanje EC50 vrednosti metodom probit analize. Ispitivanje je obavljeno u tri ponavljanja. Fungicidno odnosno fungistatično delovanje koncentracija na kojima nije zabeležen porast micelije utvrđeno je presejavanjem izolata na čistu KDA podlogu i inkubacijom sedam dana pri temperaturi od 25ºC. Na osnovu makroskopskih karakteristika kolonija (izleda i boje micelije) koje je patogen formirao na podlozi, izolati su razvrstani u dve grupe. Izolati obe grupe formirali su vazdušastu miceliju najpre beličate, a potom svetlosive do tamnosive boje, pri čemu su izolati prve grupe formirali gustu miceliju sa jasno vidljivim grupisanim hifama koje se izdižu od podloge pod pravim uglom, dok su izolati druge grupe formirali nešto ređu miceliju. Analizom dobijenih DNK sekvenci tri genska regiona utvrđeno je prisustvo dve vrste iz fam. Botryosphaeriaceae – Botryosphaeria dothidea i Diplodia seriata. Za ispitivanje osetljivosti na kombinaciju fluopiram + tebukonazol odabran je po jedan izolat obe vrste. Rezultati ispitivanja pokazali su veću osetljivost D. seriata (EC50=0,00023 μl/ml) u poređenju sa osetljivošću B. dothidea (EC50=0,00108 μl/ml) na ispitivanu kombinaciju fungicida. Na koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml nije zabeležen porast micelije izolata. Kombinacija fluopiram + tebukonazol je pri koncentracijama 100 i 1000 μl a.s./ml ispoljila fungicidno delovanje na izolat D. seriata, dok su iste koncentracije delovale fungistatično na izolat B. dothidea.", publisher = "Beograd : Društvo za zaštitu bilja Srbije", journal = "XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova", title = "Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro", pages = "78-78" }
Milošević, M., Stepanović, M., Rekanović, E.,& Stepanović, J.. (2023). Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro. in XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova Beograd : Društvo za zaštitu bilja Srbije., 78-78.
Milošević M, Stepanović M, Rekanović E, Stepanović J. Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro. in XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova. 2023;:78-78..
Milošević, Milica, Stepanović, Miloš, Rekanović, Emil, Stepanović, Jelena, "Identifikacija prouzrokovača truleži plodova jabuke iz familije Botryosphaeriaceae i osetljivost na kombinaciju fluopiram + tebukonazol in vitro" in XVII Simpozijum o zaštiti bilja - Zbornik rezimea radova (2023):78-78.